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　　一、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移入15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%CO2的细胞培养箱中培养。二、细胞传代细胞密度达到80%~90%时．去培养基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入细胞培养箱3min。加人1ml DMEM完全培养基终止胰酶消化，转移至15ml离心管。加入10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmX2min，弃上清液。再加入10ml PBS（经高压灭菌，保存于40C），吹匀，吸取10微升进行计数，按照1×105/盘接种，在含5%CO2的细胞培养箱继续培养。三、细胞冻存细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml PBS......

　　克隆化的细胞可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小

　　1．无菌环境无毒和无菌是体外培养细胞的首要条件。细胞在活体内，解毒系统和免疫系统可抵抗微生物或其他有害物质的入侵，但细胞在体外培养的过程中，缺乏机体免疫系统的保护而丧失对微生物的防御能力和对有害物质的解毒能力。为保证细胞能在体外环境中生长繁殖，必须要确保无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂

　　融合后的细胞在孔里生长时，一般并不是一个单纯的克隆（一般是两个或者多个克隆，就算肉眼看到的是形成一个完整的克隆，但事实上可能是由两个或者多个原始的杂交瘤形成的），如果直接将其扩大培养将会产生两个问题：一是如果有两个或两个以上的克隆或一个克隆实际上是由两个克隆长在一起形成的，并且都分泌抗体，那么就有可

　　由于RNA的种类来源很多，因而提取制备方法各异，一般有苯酚法，去污剂法和盐酸胍法，其中苯酚法实验室最常用。组织匀浆后用苯酚处理离心，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质，且获得生物活性的RNA。实验方法基本方案实验材料RNA

　　记者近日从中科院广州生物医药与健康研究院获悉，该院研究员裴端卿、副研究员陈捷凯等准确定位了多能干细胞诱导过程中一个极为重要的障碍，破解了产生障碍的原因并找到了清除这个障碍的办法。该研究历时4年，成果12月2日在线发表在《自然―遗传学》上。 随着2012年度诺贝尔生理或医学奖的揭晓，iPSc

　　可以不加，有时候加了会有拮抗作用。1）24孔板内以5~8x104cells/孔的密度铺板，铺足够量的孔以进行后续的梯度实验。细胞孵育过夜；（2）准备筛选培养基-含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（如0-15μg/mL，至少5个梯度）；（3）细胞孵育过夜后加入筛选培养基，孵育细胞；（4）约2-3天更换新鲜

　　实验材料 酵母菌实验步骤 1.  用含LEU 2作为选择标志的酵母菌DNA文库转化lea 2 cdc 101-1酵母菌株，在23℃培养，依据插入片段的大小，筛选2 000~20 000个Leu+转化体。 2.  影印平板转化体，将其转印到预热的选择性平板，并于37℃培养筛选互补温感突变的表型。过

　　在所有的细胞离体培养中，最困难的是动物细胞培养。下面是它所需要的特殊条件。⑴血清：动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。⑵支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用

　　1．培养基细胞培养基包含细胞生长所需的各种营养物质，包括碳水化合物、氨基酸、无机盐、维生素等。针对不同细胞的营养需求，有多种合成培养基可供选择，如EBSS、Eagle、MEM、RPMll640、DMEM等。2．其他添加成分在各种合成培养基提供基础营养物质之外，还需根据不同细胞和不同的

　　血清是我公司的主营产品，主要用于细胞培养实验，产品种属有牛(胎牛/小牛/成牛)、人(混合血型/AB血型)、马、驴猪鸡等。今天，上海劲马为大家分享使用血清细胞培养实验的操作技巧：1.保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷

　　⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期植物细胞培养过程中，光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质，如药物的过程，植物

　　动物免疫(1) 抗原制备。制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应 根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说，抗原的来源有限，或性质不稳定，提纯时易变性，或其免疫原性很强，或所需单抗是用于抗

　　动物免疫(1) 抗原制备。制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应 根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说，抗原的来源有限，或性质不稳定，提纯时易变性，或其免疫原性很强，或所需单抗

　　一、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5

　　一、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5

　　一、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10ml DMEM培养基清洗，弃上清液。加入10ml DMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5

　　一、细胞复苏将冻存细胞从液氮中取出后，在37℃水浴锅内不断摇动促进其融化。移人15ml离心管中，加入10ml预热的DMEM完全培养基，轻轻吹匀，离心，2000rpmX2min，弃上清液。加入10mlDMEM培养基清洗，弃上清液。加入10mlDMEM完全培养基，轻轻吹打，接种于10cm盘中，在含5%C

　　克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖，以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群。通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组织后代的过程。科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克隆，这门生物技术叫克隆技术，其本身的含义是无性繁殖，即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞

　　1．杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。2．单克隆抗体的类型、亚型的测定：购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清，采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书

　　菌落 PCR 分析克隆的重组体实验试剂、试剂盒溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagen

　　引物设计主要是要注意以下几个事项：（1）发夹结构；（2）反向配对；（3）GC含量（40－60%）；（4）退火温度（45－65度）；（5）引物长度（18－27bp）；（6）3 端最好是C、G（提高结合度）；（7）引物在序列中的错配位点。大致就这几个方面，重要性

　　【实验原理】免疫电泳又称为γ球蛋白电泳或免疫球蛋白电泳技术，这是一种能够判断血液中三种免疫球蛋白IgM IgG IgA含量水平的实验方法。在这项实验技术中，首先利用蛋白质的分子量和所带电荷的比值运用水平琼脂糖凝胶电泳技术将蛋白质进行分离，然后将特异性的抗体

　　实验方法原理 实验材料 A 和 B 类细胞的双链 cDNA （ds cDNA）试剂、试剂盒 ALuIRsaIATPT4 多聚核苷酸激酶及其缓冲液DNA连接酶和及其缓冲液Taq DNA聚合酶及其缓冲液寡核苷酸引物4dNTP 混合物驱动 dNTP 混合物转化感受态菌株HEPES缓冲液链霉亲和素溶

　　实验材料 质粒试剂、试剂盒 LB抗生素仪器、耗材 涂布棒硝酸纤维滤膜实验步骤 1.  通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。2.  用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。3.  取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37

　　实验方法原理 主琼脂板上和覆盖于另一块琼脂板表面的硝酸纤维滤膜或尼龙膜上的细菌克隆可以被定位， 经过一段时间，已经在滤膜上生长的克隆可以被原位裂解以备杂交之用。同时，主琼脂板可置于 4℃ 保存，直到筛选的结果出来为止。实验材料i试剂、试剂盒 LB 或 SOB 琼脂板仪器、耗材 硝酸纤维素